OPAL/Tyramide Signal Amplification

Le multimarquage ou multiplexing sur coupe paraffinée via la méthode Opal® Akoya est développée sur la plateforme. Cette technique permet de réaliser de multiples immunomarquages séquentiellement et donc d’étudier de nombreux marqueurs.
Il est possible de mettre en évidence jusqu’à 6 marqueurs + DAPI (ou autre marqueur des noyaux), sur une même coupe de tissu paraffiné.

Réaliser un multimarquage de manière classique sur tissu paraffiné comporte plusieurs limites :
- la fixation préalable du tissu par le formol génère une autofluorescence négligeable de ce tissu, rendant difficile la mise en évidence des marquages spécifiques.
- Rapport signal sur bruit parfois faible: les fluorochromes couplés aux anticorps secondaires n’émettent pas toujours un signal suffisamment fort pour distinguer le marquage spécifique de l’autofluorescence du tissu
- il est nécessaire d‘utiliser des anticorps primaires d’espèces différentes afin d’éviter les réactions croisées entre anticorps primaires et anticorps secondaires.

La méthode Multiplexing Opal® Akoya sur tissu paraffiné présente alors des avantages :
- les anticorps primaires peuvent provenir de la même espèce
- le signal est amplifié grâce à l’utilisation de la molécule de tyramide (système TSA Tyramide Signal Amplification) couplée aux fluorochromes.
- les fluorochromes Opal® sont particulièrement brillants.

L’observation des multimarquages peut se réaliser sur le microscope confocal de la plateforme, en mode spectral. Afin de distinguer chacun des marquages spécifiques, une séparation des spectres émis par chacun des fluorochromes est requise.