Video Microscopie Leica
La plateforme PIcell possède un microscope widefield Leica DMI 6000B essentiellement dédié aux mesures dites de time-lapse, où les cellules/tissus d'intérêt sont imagés (en fluorescence et/ou fond clair) sur des échelles de temps allant jusqu'à plusieurs jours.
Le microscope est doté d'un système de contrôle de température et de CO2.
Trajet Optique
Contrairement aux autres microscopes présents sur la plateforme, le Leica 6000B ne possède pas de cubes dichroïques (où les filtres d'excitation et émission sont indissociables) Cet appareil est doté d'une lampe à Xénon et d'un système de roues de filtres d'excitation et d'émission permettant d'imager un grand nombre de fluorochromes, et notamment ceux présentant un déplacement de Stokes important.
Ce système de roues de filtres implique une acquisition séquentielle des canaux de fluorescence
La fluorescence est détectée par une caméra CCD (Roper Coolsnap HQ2)
Time Lapse
Le microscope est piloté par le logiciel Metamorph (Molecular Devices ), et est optimisé pour les acquisitions multi-positions/multi-canaux sur des time-lapse longs. En plus d'être un logiciel d'acquisition complet, Metamorph permet de réaliser des montages et analyses d'images complexes.
Time Lapse 72 heures ( 394 images /canal), fibroblastes non marqués, cellules tumorales GFP sur matrice de collagène
Sondes Ratiométriques
De plus, la station de pilotage du microscope possède le logiciel Metafluor (Molecular Devices) plus particulièrement dédié à l'acquisition et l'analyse de sondes ratiométriques (double excitation ou double émission)
Interaction Lymphocyte T/cellule cible HEK GFP-tagged. A gauche, tracking du LT marqué au fura-2; à droite représentation en pseudocouleurs du marquage GFP dela cellule HEK.
Mesure de Calcium et tracking cellulaire (Gavlovski PJ, 2015)