Comptage de Photons PicoQuant
Le microscope confocal A1 est couplé au système de comptage de photon PicoQuant (picoharp 300) permettant:
- des mesures de temps de vie de fluorescence (FLIM) via le pilotage d'un laser pulsé 488nm.
- des mesures de FCS (Fluorescent Correlation Spectroscopy).
Le système de comptage de photons uniques est basé sur un couplage entre un laser pulsé (Picosecond Diode Laser, 488nm) et un capteur SPAD (Single Photon Avalanche Diode). Entre chaque impulsion du laser, le système mesure le temps écoulé avant que le capteur ne récupère le 1er photon émis. L'accumulation de ces événements permet de définir le temps de vie moyen de la fluorescence présente dans chaque pixel de l'image.
Mesure de Temps de Vie de Fluorescence (FLIM)
La mesure du déclin d'intensité de fluorescence renseigne sur la valeur de temps de vie de fluorescence. Ces temps de vie, connus pour la plupart des fluorochromes, peuvent être altérés par l'environnement des fluorophores.
De telles mesures peuvent, par exemple, révéler des interactions protéines-protéines dont les fluorophores respectifs entrent en FRET (transfert d'énergie).
De telles mesures peuvent, par exemple, révéler des interactions protéines-protéines dont les fluorophores respectifs entrent en FRET (transfert d'énergie).
Spectroscopie de Correlation de Fluorescence (FCS)
La spectroscopie de corrélation de fluorescence (FCS) est une technique d'imagerie basée sur la mesure des fluctuations de l'intensité de fluorescence au cours du temps au sein d'un volume confocal. Cette technique permet de déterminer le nombre moyen de molécules dans le volume d'observation, ainsi que leur vitesse via l'utilisation d'une fonction d'autocorrélation. Cette approche permet de documenter de manière très fine la dynamique des molécules observées.
(D'après Didier Marguet)
Symphotime
Applications
De nombreuses applications du système de comptage de photons uniques existent: FLIM, FRET, caractérisation de tissus par mesure d'autofluorescence, caractérisation de particule ou de matériaux. Ces possibilités sont détaillées dans l'article ci dessous.
Upgrade du Nkon A1
Le module de comptage de photons uniques PIcoQuant est couplé au microscope confocal Nikon A1 présent sur la plateforme. Les détails techniques sont consultables sur le fichier PDF ci dessous.
Mis à jour le 08 janvier 2014.